HPLC方法建立期間，在第一次進(jìn)樣前，我們必須有把握所選擇的檢測器能檢測到所有的被測樣品組分。通常可變波長紫外(UV)檢測器，因這種檢測器使用方便，且可用于大多數(shù)樣品。uV光譜信息對方法建立具有舉足輕重的地位，uv光譜數(shù)據(jù)可從文件使用”pdf Fact ory”試用版本創(chuàng)建文獻(xiàn)中查找，也可通過所測樣品成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)估算；直接測得（如果可拿到化合物純品）或在HPLC分離期間用二極管陣列檢測器(PDA）得到。樣品對uv檢測響應(yīng)不足時(shí)，町考慮使用其它類型檢測器(熒光，電化學(xué)等)，或衍生化樣品使檢測信號(hào)增強(qiáng)。
 

          樣品來源形式不同，可能以如下形式出現(xiàn)：
          1．可直接進(jìn)樣的溶液
          2．需稀釋、pH緩沖、加入內(nèi)標(biāo)或其它定容操作的溶液
          3．必須首先溶解或提取處理的固體
          4．樣品需預(yù)處理以除去十?dāng)_物和／或保護(hù)色譜柱或儀器不受損害
          可直接進(jìn)樣的樣品有操作方便、精密度好的優(yōu)點(diǎn)，然而大多數(shù)HPLC分析的樣品需稱重和／或稀釋定容后才能進(jìn)樣。當(dāng)樣品溶劑成分接近于流動(dòng)相時(shí)，一般不會(huì)產(chǎn)生基線波動(dòng)等問題，通常能夠得到較好的結(jié)果。
          有些樣品在注人HPLC前需進(jìn)行部分分離（預(yù)處理），以除去干擾物、濃縮樣品或消除“柱殺手”，因此了解樣品基質(zhì)和各種被測物的濃度范圍非常重要。許多情況下，建立滿足要求的樣品預(yù)處理方法甚至比完成一次良好的HPLC分離更具挑戰(zhàn)性。