培養(yǎng)基是是發(fā)酵過程或動植物細胞大量培養(yǎng)中供微生物或動、植物細胞的生長、繁殖或積累代謝產(chǎn)物,以合成生物化工產(chǎn)品所必需的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)。

1.1 購置

微生物檢驗用的各種藥品、試劑和干粉培養(yǎng)基必須是專業(yè)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品,質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標準,并且生產(chǎn)商應(yīng)提供培養(yǎng)基的名稱、產(chǎn)品編號、批號、各種成分和任何補充成分、培養(yǎng)基使用前的pH值貯存資料及有

效期等信息,以利于使用者對產(chǎn)品進行記錄和比較。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。

1.2 驗收

購買的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專人做好接受和驗收工作，應(yīng)仔細核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對培養(yǎng)基的質(zhì)量進行檢測，滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。

干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養(yǎng)基保存期限應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的信息執(zhí)行，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并盡快用完。應(yīng)定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查，如容器密閉性復查、開封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3.1 培養(yǎng)基用水

培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。

3.2 稱量

稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。干粉培養(yǎng)基應(yīng)嚴格按照生產(chǎn)商提供的有關(guān)說明準確配制。

3.3 復水

復水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長；容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應(yīng)使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。

3.4 滅菌

培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中 規(guī)定的條件及時進行滅菌，通常是121℃ 15 min，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標準或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

3.5 pH測定

微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。滅菌前后PH會有所變化，所以滅菌前就要準備好，可以用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調(diào)整，注意不可反復調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。

3.6 配制好的培養(yǎng)基保存

滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所以建議平板傾注后立即使用。保存時,盡可能貯存在不會改變其成分的條件下，即避光或在4 ℃ ~ 12℃冰箱密閉保存。如果保存時間超過2d,應(yīng)將其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其他密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。