培養(yǎng)基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養(yǎng)基的實驗室質量控制,認真地做好培養(yǎng)基的質控工作,不斷完善和提高培養(yǎng)基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養(yǎng)基。
1.外觀控制
制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色,一般的培養(yǎng)基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,是否蒸發(fā)/脫水。
2.污染控制
從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
3.性能測試
3.1 測試菌株選擇
測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質量檢驗規(guī)程》。
3.2 定量測試方法
改良Miles-Misra法:測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域,37°C培養(yǎng)18小時;對易計數的區(qū)域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1 。
3.3 半定量測試方法
改進的劃線法接種法:平板分ABCD四區(qū),共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養(yǎng)基可接受 。
3.4 定性測試方法
平板接種觀察法:用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物,在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng),目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標菌應是微弱生長或無生長 。